DBI® Bioscience 用户深度体验报告 — 1002

本人何勇槟,男,就读于广东省广州市南方医科大学第一临床医学院,专业为外科学。2016年,在经过之前的实验准备之后,我终于开始要进行PCR实验了。第一次学习PCR知识的时候,我就觉得发明人Kary Mullis真是个天才,他能够想出这么巧妙的技术将原本含量很少的DNA进行扩增,使其含量足够多并可用于实验、鉴定等,使得实验、刑侦等方面有显著的进步。尽管现在的PCR技术已经有明显的发展,PCR过程也相对简单、技术路线也很明确,但是对于我这样的小白来说,还是存在一定的难度。毕竟看的、听的可能会觉得简单,只有自己做了才会察觉实验过程还是有不少需要注意的。查找文献、资料,咨询做过PCR的师兄、师姐,购买Trizol、氯仿、异丙醇、乙醇、DEPC和PCR过程中主要的试剂(DBI公司的Bestar® one step RT qPCR kit 和Bestar qPCR Master Mix SYBR GREEN)以及其它相关试剂和耗材。为了更好进行实验,我还提前去观摩师兄做PCR的过程。万事具备,只欠上手啦。我提取的是接种在6孔板上细胞的DNA,实验过程大致为:提取细胞RNA、将RNA逆转录为cDNA,将cDNA进行PCR扩增。过程看似简单,我也以为会很顺利,但是没想到在第一步即提取细胞RNA就出现了问题。正常情况下在加入异丙醇进行离心后,应该出现白色的RNA沉淀,但是我做完这步之后基本上没看到白色沉淀。哪里出现了问题?没提出来?也不是啊,至少管壁上还有一点点隐约可见的白色沉淀。应该就是提取出来的RNA量太少了,量太少可是很影响后续实验的啊,这可怎么办好!又查找资料、请教师兄师姐,最后终于有改进的方法:要么增加初始提取细胞的数目;要么在加完异丙醇之后不要继续离心,而是加入糖原使其沉淀增加。我决定两个一起来,于是重新养细胞、加干预、加糖原,终于这次在灯光下我可以看到一小块椭圆形的白色沉淀了,成功了!

也许上天不忍继续折腾我,后续的RNA浓度、纯度测量顺利。而逆转录、PCR操作按照DBI产品上的说明书进行也一切顺利,最后终于看到了期望的彩色曲线。感谢DBI提供此次机会让我说出我的实验故事,也希望大家能有机会一起交流,共同进步,希望大家实验顺利。




2017年07月13日

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