DBI® Bioscience 用户深度体验报告 — 1001

本人古书琴,女,就读于广东省广州市南方医科大学第一临床医学院,专业为内科学。本科毕业后,我又上了本校的研究生,因此在同届研究生中我应该算是比较早接触实验的,因为我同年7月份就去实验室了。去了实验室就学习相关的实验技术、仪器操作,在具备基本知识、能操作基本仪器之后,我也要开始小试牛刀啦。在众多实验过程中,有一个和我比较相关的就是提取血液中特定细胞的相关基因表达。

幸运的是和我同个专业的师兄、师姐也进行相关的实验,所以我们有一套比较规范的操作步骤,从细胞RNA的提取、浓度纯度的测量,到合格RNA的逆转录,以及最后的PCR,使得我的实验过程相对简单。在对相关知识进行学习以及观摩师兄、师姐的操作后,我也开始自己进行实验了。离心细胞,加入Trizol吹打细胞,加入氯仿后震荡混匀(用手剧烈震荡15s),分层后取上层水相(小枪头吸,不要吸到下面的中间层和下层,以免污染),再加异丙醇(可根据预实验酌情添加糖原),顺利的话离心后就可以看到白色的RNA沉淀,乙醇洗涤后将RNA沉淀干燥(室温下5~10min,变为透明样,勿干燥过度),再加入DEPC水溶解后,就可以进行RNA浓度纯度(A260/A280一般在1.8~2.0为佳)的测量。

RNA合格后就可以利用DBI的逆转录试剂盒按照说明书上机操作啦,而逆转录得来的cDNA,如果没时间马上做也可以放置于-80oC进行保存;但是有时间还是推荐继续进行PCR操作,这时候可以利用DBI的PCR试剂盒进行PCR实验。不过做过的人就知道,一般一次PCR要加的样本、引物、试剂很多,常常是一个板96孔都用上,一个孔往往要加入四五种试剂,这个确实是考验眼力、耐力的啊。而且这么多孔加这么多东西,又不能用排枪,一个孔、一种试剂的加很容易就会出现漏加或者重复加的。我个人习惯就是先对样本、基因进行归类,然后按照96孔板的8×12的格式写出来,放在旁边,做的时候可以对着看。具体操作的时候,由于一个孔中一种试剂需要的加样量太少(可能就零点几微升到几微升),而且PCR八联管还是不透明的,所以有时候会不知道到底加样加进去没有。因此我会把枪头靠着管壁、眼睛看着进行加样,确保样品加入管中。顺利的话全部加完进行离心后就可以上机进行PCR操作啦,再顺利的话就会看到你想要的扩增曲线、溶解曲线啦。最后希望大家实验顺利啦。



2017年06月30日

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